Este trabalho tem como objetivo analisar as percepções de estudantes do ensino médio sobre a aplicação da biotrilha como metodologia ativa para o ensino de Biologia. O referencial teórico utilizado para embasar esse estudo consiste em pesquisas presentes na literatura sobre a utilização de jogos educativos lúdicos como recursos pedagógicos e os impactos no processo de ensino-aprendizagem. Para coleta de dados, utilizou-se as técnicas de observação participante e questionário virtual criado por meio da plataforma Google Forms. Cabe destacar que o projeto consta com a aprovação do Comitê de Ética Humana da UFRPE (nº 4.933.983). Os dados foram sistematizados e analisados à luz da Análise Textual Discursiva (ATD). Os participantes da pesquisa foram estudantes de turmas do ensino médio do Colégio Agrícola Dom Agostinho Ikas da UFRPE (CODAI), vinculado à Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE). Como principais resultados verificou-se que o uso da biotrilha contribuiu de forma positiva para estimular o interesse dos estudantes em participar das aulas, incentivar o trabalho em equipe e servir como um instrumento de contextualização entre os conteúdos e o cotidiano dos alunos. Os dados revelaram ainda que a aplicação da biotrilha propiciou uma experiência de aprendizado mais dinâmica e descontraída em ambientes não formais de ensino, configurando-se como metodologia ativa para trabalhar os temas de biologia de forma articulada, envolvendo os estudantes na construção do conhecimento dentro da perspectiva da aprendizagem significativa.