O ensino da Citologia está voltado para a compreensão das células, sua estrutura, organelas e suas funcionalidades. Estudos indicam que há uma percepção reduzida da importância da Citologia entre os estudantes, o que reflete na forma de ensino nas escolas. Este estudo teve como objetivo analisar os conteúdos de Citologia presentes nas provas da primeira fase da Olimpíada Brasileira de Biologia (OBB), aplicadas entre os anos de 2018 e 2025. A pesquisa teve duas etapas: (1) coleta e análise de provas da OBB; e (2) análise quantitativa e qualitativa das questões relacionadas à Citologia, considerando o conteúdo programático oficial da OBB. Foram analisadas 235 questões, das quais 60 abordaram conteúdos de Citologia. O maior número de questões de Citologia foi registrado entre 2018 e 2020, com 11 questões cada, seguidos de 2021, com 10 questões. Esse número coincide com o contexto da pandemia do coronavírus, o que explica o destaque do conteúdo de Imunologia e Vírus, que somaram 19 questões (31,7%). Temas como resposta imune contra infecções virais, ação de anticorpos, vacinação e epidemia foram frequentes, geralmente de forma que exigiam interpretação conceitual e raciocínio contextualizado. Outras subáreas como Organelas Citoplasmáticas (21,6%), Biologia Molecular e Núcleo (16,7%), Composição química (16,7%) e Metabolismo energético (10%) também se destacaram, apontando a integração entre Citologia, Bioquímica e Fisiologia. No entanto, temas clássicos, como especializações da membrana plasmática e sais minerais, permanecem pouco explorados. Conclui-se que, embora a Citologia esteja presente de forma constante na OBB, sua abordagem é desigual entre as subáreas, indicando a necessidade de diversificar essa representação. Além disso, o estímulo à participação dos estudantes na OBB configura-se como estratégia pedagógica eficaz, pois, diante da natureza contextualizada e interdisciplinar das provas analisadas, exige do professor o uso de recursos didáticos atualizados, favorecendo aprendizagens alinhadas à Base Nacional Comum Curricular.