Introdução: O ensino superior de enfermagem é fundamental na formação de profissionais capacitados para atuar em diversas áreas da saúde, desempenhando um papel crucial no cuidado e na promoção da saúde da população. No entanto, são enfrentados desafios nas instituições pelos docentes e discentes de ensino superior no turno noturno. Objetivo: relatar e analisar os desafios enfrentados pelos docentes, discentes e instituições de ensino no contexto do ensino superior de enfermagem no turno noturno. Método: Trata-se de um estudo de caráter qualitativo com abordagem descritiva, do tipo relato de experiência, elaborado através de vivências educacionais em uma faculdade privada no processo de ensino. Resultados: desvela-se cinco categorias as quais foram analisadas criticamente: 1. Fadiga e cansaço dos estudantes (horários exaustivos de serviços diurnos ou plantões para conciliar com a graduação); 2. conflitos de horários dos trabalhos e aulas (choque de horário com os plantões e aulas, tempo de locomoção para faculdade); 3. Acesso limitado aos recursos e metodologias ativas de ensino (falta de conhecimentos e tempo para desenvolvimento de habilidades com metodologias ativas); 4. Falta de segurança no ambiente de ensino (o ensino no turno noturno apresenta insegurança para assaltos, furtos e deslocamentos dos docentes e discentes); 5. Menor interação social entre os discentes com o docente (devido ao tempo restrito de carga horária, a interação entre o facilitador e aprendiz apresenta restrições durante o processo de aprendizagem). Conclusão: O ensino superior de enfermagem no turno noturno apresenta uma série de desafios, tanto para os alunos, instituições educacionais e os docentes, além do mais interfere diretamente no processo de ensino-aprendizagem, assim conhecer estes desafios demostra um avanço para implantação de estratégias. Assim, visa contribuir para uma melhor compreensão dos impactos do turno noturno no processo de aprendizagem e no bem-estar dos estudantes, além de fornecer informações e reflexões valiosas para aprimorar as práticas educacionais e promover o sucesso acadêmico e profissional dos futuros enfermeiros.