Buscando estabelecer relações entre educação não formal e formação inicial, o presente trabalho tem por objetivo analisar como a mediação nos museus pode contribuir para a formação inicial de professores de ciências. A partir de uma metodologia qualitativa de cunho descritivo, foi realizada Análise de Conteúdo de respostas dadas a uma entrevista aplicada a mediadores de um Museu de Ciências localizado no Rio de Janeiro, nossos sujeitos da pesquisa, gerando categorias. Como resultados temos que o mediador precisa se adaptar ao público que está atendendo, pensando em novas estratégias que serão aplicadas em atividades educativas e que alcancem diferentes públicos. Dessa forma, a mediação pode contribuir com a formação de professores visto que ambas as atividades possuem um conjunto de métodos e práticas que convergem em determinados aspectos e geram uma formação mais elaborada, crítica e inovadora para a prática docente, ligada à cultura, ciência e sociedade.