O mandacaru (Cereus jamaracu) é um dos principais representantes dos cactos da Caatinga, apresentando potencial ornamental, forrageiro, medicinal e industrial. A germinação in vitro desta espécie pode auxiliar na sua multiplicação e conservação; portanto, é necessário o estabelecimento de protocolos eficientes de desinfestação do material a ser introduzido in vitro. Objetivou-se definir o tipo e a concentração de desinfestante para a assepsia de sementes de mandacaru sem espinho. As sementes foram separadas da polpa, submetidas à imersão em hipoclorito de sódio ou de cálcio em concentrações de 1,25 e 2,5%, e posteriormente inoculadas em meio simplificado. Após sete dias de cultivo o tratamento com hipoclorito de cálcio a 1,25% contaminou 100%, o que inviabilizou a germinação das sementes; e ao final de 45 dias o tratamento com hipoclorito de sódio, em ambas as concentrações, apresentou os menores valores de contaminação e os maiores valores quanto à taxa de germinação, mostrando-se, portanto, ser o mais eficiente para a desinfestação de sementes de mandacaru sem espinho.