A produção de ramnolipideo foi investigada por linhagens de Pseudomonas aeruginosa, da Coleção de Culturas do Departamento de Antibióticos, utilizando glicerol e nitrato como fontes de carbono e de nitrogênio, respectivamente. Houve produção de ramnolipídeo, medido pela concentração de ramnose, pelas cinco linhagens, assim como consumo do glicerol. As concentrações de ramnose variaram entre 0,05 e 1,38 g/L. A tensão superficial foi menor que 20 mN/m em todos os casos e o índice de emulsificação variou entre 57 e 79 %. A linhagem (UFPEDA 569) que apresentou menor produção (0,05 g/L) foi selecionada, numa tentativa de aumentar a produção do biossurfactante. Para isso, foram realizadas modificações no meio de cultura, com relação às concentrações de glicerol e de nitrato. Foi aplicado um planejamento composto central rotacional, realizando-se um total de 10 ensaios, sendo quatro ensaios do planejamento fatorial, quatro dos pontos axiais e mais dois ensaios no ponto central. Apesar de não ter sido ajustado satisfatoriamente um modelo quadrático, dependendo das concentrações dos fatores, houve aumento de até 12 vezes em relação ao meio inicialmente utilizado. As melhores concentrações de glicerol e de nitrato de sódio foram 20 e 6 g/L, respectivamente.