O ácido desoxirribonucleico (DNA) é uma molécula responsável por possuir em sua estrutura a informação genética necessária para especificar todos os processos que tornam o organismo funcional. No decorrer da maior parte dos processos onde é fundamental o acesso às informações contidas nas hélices de DNA, faz-se imprescindível a separação das fitas e, devido a forma de dupla hélice compactada, ocasionara-se uma supertorção das fitas de DNA, o que pode acarretar a quebra das mesmas. As DNA topoisomerases são as enzimas responsáveis por evitar as supertorções e possibilitar a execução desses processos celulares sem danos a fita de DNA. Nesse sentido, esse artigo trata-se de uma revisão sistemática através do levantamento bibliográfico geral por meio de pesquisas em bases de dados eletrônicas tais como Science Direct, Periódicos CAPES, SciELO, LILACS e Google Acadêmico, optando-se por publicações com os idiomas inglês e português, sendo esses publicados entre janeiro de 2000 até a atualidade. Como resultados foram abordados mais profundamente as enzimas DNA topoisomerases, suas classificações e sua relevância como alvo farmacológico. Essas são classificadas de acordo com o seu mecanismo de ação em topoisomerases I e II onde, a partir dessas, surgem as subfamílias que apresentam não apenas o mecanismo de ação diferente, como também as características das enzimas e as espécies que as possuem. Sendo assim, estando presente nas mais variadas espécies, estas enzimas são reconhecidas como um potencial alvo farmacológico, principalmente para terapia antitumoral e antibacteriana, pois são capazes de interromper a replicação de células cancerígenas e são capazes de cessar a proliferação das bactérias.