BIOLOGIA MOLECULAR PARA O DIAGNÓSTICO DA DENGUE: AMPLIFICAÇÃO DO VETOR DE CLONAGEM PGEX-2T EM CÉLULAS E. COLI QUIMIO-COMPETENTES E DIGESTÃO DO VETOR COM A ENZIMA DE RESTRIÇÃO SMAI
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Entre eles, a amplificação in vitro do gene da proteína E dos sorotipos 2 e 4 do vírus da dengue por PCR, geração de células quimio-competentes a partir de culturas de Escherichia coli BL21 em meio LB, digestão do vetor de clonagem pGEX-2T com enzima de restrição SmaI e a transformação bacteriana com vetor por meio de choque térmico com posterior crescimento em meio de recuperação contendo o vetor de clonagem. A seleção das células transformadas foi feita por cultura em meio seletivo contendo ampicilina, cuja resistência é conferida pelo vetor pGEX-2T. O objetivo do projeto, que envolve etapas futuras, é o desenvolvimento de um teste imunodiagnóstico de MAC ELISA rápido e barato onde se possam distinguir os 4 diferentes sorotipos do vírus com importância epidemiológica na atualidade. Os testes realizados nesta pesquisa fazem parte dos procedimentos necessários à clonagem e expressão da proteína E do DENV, cuja realização está em andamento nas dependências da Central de Laboratórios Três Marias, do Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS) da Universidade Estadual da Paraíba - UEPB. Foram estabelecidos protocolos para importantes etapas do processo de clonagem e expressão da proteína E da dengue em E. coli. Alguns procedimentos e técnicas aplicados neste estudo ainda não haviam sido realizados na Universidade Estadual da Paraíba e, portanto, este trabalho também contribuiu para a disponibilidade destas técnicas na instituição, abrindo possibilidade de realização de novos trabalhos nesta linha de pesquisa." 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