Artigo Anais I CONAPESC

ANAIS de Evento

ISSN: 2525-6696

BIOLOGIA MOLECULAR PARA O DIAGNÓSTICO DA DENGUE: AMPLIFICAÇÃO DO VETOR DE CLONAGEM PGEX-2T EM CÉLULAS E. COLI QUIMIO-COMPETENTES E DIGESTÃO DO VETOR COM A ENZIMA DE RESTRIÇÃO SMAI

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Publicado em 01 de junho de 2016

Resumo

No presente trabalho, foram realizados testes relacionados ao processo de clonagem do gene da proteína do envelope (proteína E) do vírus da dengue. Entre eles, a amplificação in vitro do gene da proteína E dos sorotipos 2 e 4 do vírus da dengue por PCR, geração de células quimio-competentes a partir de culturas de Escherichia coli BL21 em meio LB, digestão do vetor de clonagem pGEX-2T com enzima de restrição SmaI e a transformação bacteriana com vetor por meio de choque térmico com posterior crescimento em meio de recuperação contendo o vetor de clonagem. A seleção das células transformadas foi feita por cultura em meio seletivo contendo ampicilina, cuja resistência é conferida pelo vetor pGEX-2T. O objetivo do projeto, que envolve etapas futuras, é o desenvolvimento de um teste imunodiagnóstico de MAC ELISA rápido e barato onde se possam distinguir os 4 diferentes sorotipos do vírus com importância epidemiológica na atualidade. Os testes realizados nesta pesquisa fazem parte dos procedimentos necessários à clonagem e expressão da proteína E do DENV, cuja realização está em andamento nas dependências da Central de Laboratórios Três Marias, do Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS) da Universidade Estadual da Paraíba - UEPB. Foram estabelecidos protocolos para importantes etapas do processo de clonagem e expressão da proteína E da dengue em E. coli. Alguns procedimentos e técnicas aplicados neste estudo ainda não haviam sido realizados na Universidade Estadual da Paraíba e, portanto, este trabalho também contribuiu para a disponibilidade destas técnicas na instituição, abrindo possibilidade de realização de novos trabalhos nesta linha de pesquisa.

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