A prática de atividade física em ambientes abertos tem se tornado cada vez mais comum, portanto é importante um ambiente adequado e propício a essa prática, se tornando a qualidade do ar essencial, além de exercer influências na saúde e bem estar dos praticantes. O objetivo desse estudo é quantificar a concentração de fungos e bactérias para determinar a qualidade microbiológica do ar. Foi avaliado um percurso de 1600 metros da Avenida Rio Branco, um espaço popular na prática de atividade física na cidade de Mossoró-RN, foram definidos quatro pontos de coleta, há aproximadamente 400 metros de distância um do outro, nos meses de junho e julho de 2016, em quatro semanas consecutivas, sendo uma coleta em cada semana, no horário entre 16:30 e 18:00 horas. Foi utilizado o método de sedimentação em placas de Petri com seus respectivos meios de cultura, as placas ficaram expostas em triplicata por meia hora em cada ponto, em bancos de aproximadamente um metro de altura. Após as coletas, foram incubadas no Laboratório de Microbiologia da Universidade Rural do Semi Árido, e posteriormente quantificados e identificados. Os resultados mostraram que o número de bactérias foi maior nos pontos P3 e P4, e em relação aos fungos o ponto P3 se destacou com maior quantidade, ambos os pontos haviam maior quantidade de pessoas circulando. Dessa forma pode-se concluir que o ambiente avaliado houve maior quantificação nos pontos onde havia maior número de pessoas circulando, e apesar do resultado, os pontos avaliados se mostraram aptos para a prática de atividade física, pela baixa quantidade de microrganismos.