Este trabalho é um recorte da pesquisa de doutorado em andamento, vinculado ao Programa de Pós-Graduação em Educação Escolar da Universidade Federal de Rondônia (UNIR/PPGEEProf), o objetivo deste estudo é entender quais os desafios enfrentados pelos/as professores/as da Educação Infantil acerca da sexualidade no contexto escolar. Como recursos metodológicos, utilizou-se a abordagem qualitativa por meio de uma pesquisa de campo, com a aplicação de uma entrevista semiestruturada. Participaram da pesquisa cinco professoras de um Centro Municipal de Educação Infantil (CMEI) do Município de Ji-Paraná/RO. Os dados foram analisados à luz da análise de conteúdo. A partir dos resultados, compreendeu-se que as professoras da Educação Infantil enfrentam dificuldades relacionadas às manifestações sexuais das crianças, uma vez que, a falta de formação acadêmica e continuada destes profissionais, causa sentimento de insegurança frente a esta temática. Outra dificuldade enfrentada pelas educadoras está relacionada ao âmbito familiar da criança, visto que há grande resistência em falar e discutir sobre a sexualidade, o que se torna uma barreira na abordagem desse tema no contexto educacional. Desse modo, considera-se que a consolidação de discussões em espaços acadêmicos, a implementação de disciplinas e técnicas interventivas nas grades curriculares dos cursos que se propõem formar professores; assim como o aprofundamento no conhecimento do desenvolvimento infantil; e investimentos na formação continuada são ações necessárias para a construção de práticas no estudo sobre a sexualidade infantil.