O cultivo in vitro constitui uma alternativa à conservação e à propagação convencional de espécies ameaçadas pela ação antrópica e que apresentem relevante potencial de uso, como a coroa-de-frade. Assim, objetivou-se estudar a germinação in vitro e o desenvolvimento inicial de plântulas de Melocactus zehntneri sob diferentes meios de cultura. Para tanto, as sementes foram desinfestadas e inoculadas in vitro em quatro tratamentos que apresentavam concentrações variadas de sais e de sacarose, e mantidas em sala de crescimento por 60 dias. Após este período, verificou-se que o maior percentual de germinação ocorreu no meio com menor quantidade de sais e sacarose (½ MS + 1,5%). Tal tratamento também propiciou um bom desenvolvimento das plântulas, sendo recomendado para a germinação da referida espécie, com fins de conservação e/ou de obtenção de material propagativo para o cultivo in vitro.