Os bagres Brachyplatystoma são espécies de importância comercial na Amazônia e os produtos processados são mais valorizados, embora sejam alvos de substituições. Portanto, desenvolvemos um protocolo rápido, baseado em PCR multiplex mini-barcode da COI mitocondrial, para autenticar filés rotulados como filhote (Brachyplatystoma filamentosum), dourada (Brachyplatystoma rousseauxii) e piramutaba (Brachyplatystoma vaillantii). Foram analisadas 138 amostras de dourada (N = 46), piramutaba (N = 46) e filhote (N = 46) e os resultados mostraram que 64,5 % dos filés (N = 89) foram rotulados corretamente pois continham o fragmento espécie-específico com ~300 pb para o filhote, ~254 pb para piramutaba e ~88 pb para dourada, além da banda controle do rDNA 16S (~160 pb). Porém, 35,5% das amostras (N = 49) não correspondiam à espécie descrita no rótulo, sendo a dourada a mais substituída (91,3 %, N = 42/46), seguida do filhote (15, 2%, N = 7). Não houve substituição para a piramutaba, espécie de menor valor comercial. Dentre as substituintes de dourada foram identificadas piramutaba (N = 40), por PCR multiplex, e Calophysus macropterus (N=2), por sequenciamento de DNA barconding; entre as substituintes de filhote foram identificados Sciades proops (N=5) e Sciades parkeri (N=2), também por sequenciamento de DNA barcoding. As substituintes de dourada e filhote são espécies de menor valor comercial e entre as substituintes de filhote há espécie vulnerável (S. proops) de acordo com a IUCN. Portanto, os resultados corroboram resultados prévios de que as substituições ocorrem no comércio de bagres Brachyplatystoma e abrangem as espécies de maior valor econômico que são substituídas por produtos mais baratos, o que caracteriza fraude comercial. Também, as substituições configuram danos à biodiversidade uma vez que uma espécie vulnerável foi identificada. Nosso protocolo foi eficiente, rápido e custo efetivo na autenticação das espécies e pode ser utilizado pela fiscalização para coibir fraudes.
