O rio Dourados é um dos principais afluentes do rio Ivinhema, pertencendo a bacia do alto rio Paraná na porção leste do estado de Mato Grosso do Sul. Esta sub-bacia apresenta estudos incipientes sobre sua fauna de peixes, portanto, o objetivo deste trabalho foi realizar um inventário e caracterizar a estrutura da ictiofauna do riacho Cristalina, um afluente de 2ª ordem do rio Dourados. As coletas foram realizadas em seis pontos amostrais entre julho e setembro de 2022, e janeiro e março de 2023. As amostragens ocorreram em trechos de 60 metros, utilizando redes de arrasto e puçá. A suficiência amostral foi testada através da curva de rarefação e extrapolação da riqueza de espécies. Foram amostrados 1.209 indivíduos, distribuídos em 32 espécies, 29 gêneros, 13 famílias e seis ordens. Characiformes e Siluriformes representaram 81,25% da riqueza de espécies, e as famílias com maior riqueza fora Characidae, Heptapteridae e Loricariidae. A maior diversidade foi encontrada nos pontos P1, P4 e P3, e as espécies com maior ocorrência foram Piabarchus stramineus e Astyanax lacustris. O ponto P1 apresentou maior diversidade de espécies e elevada riqueza. De acordo com o estimador de riqueza, exceto os pontos P2 e P6 não foram amostrados de forma suficiente, mas ainda assim, o ponto P6 foi o que apresentou a maior riqueza, abundância e biomassa. Este é o primeiro levantamento da ictiofauna na microbacia do riacho Cristalina, contendo informações relevantes para estudos futuros sobre distribuição, biologia e ecologia das espécies em riachos da bacia do rio Dourados, MS.
