Promover a aprendizagem em sala de aula é desafiador, e para isto, a prática do professor deve acontecer sob uma reflexão constante de sua didática e metodologias que possam facilitar a aprendizagem do aluno. Além disso, as dificuldades de aprendizagem podem ser motivadas por fatores internos e externos ao aluno, tais como desinteresse, inadequação metodológica, condições insalubres de ensino, por exemplo. Pensando nisso, o objetivo deste artigo foi diagnosticar as dificuldades de aprendizagem na componente biologia, enfrentadas por alunos de duas turmas do ensino médio técnico integrado do Instituto Federal do Amapá campus Laranjal do Jari/AP, a fim de nortear as estratégias de ensino docente. Para levantar as informações de dificuldades do ponto de vista do aluno, foi aplicado um questionário anônimo e confidencial online com cinco perguntas objetivas (sem resposta certa) e uma pergunta de opinião, para alunos do 2º e 3º ano, ao final de uma aula de biologia. Dos 34 alunos que responderam ao questionário 55,9% afirmaram ter muito interesse por biologia; 67,6% concordam que a metodologia do professor, o qual utiliza em aula o quadro, desenhos ilustrativos e questionários impressos, fazendo a relação com o cotidiano do aluno e suas experiências vivenciadas facilitam a aprendizagem; 64,7% afirmam que a grande quantidade de nomes técnicos dificulta um pouco ou bastante a aprendizagem; 47,1% apresentam dificuldades de acompanhar as aulas por ocorrerem nos últimos horários do turno da manhã (11h:05min à 12h:45min); e a maioria dos alunos tem preferência por aulas de laboratório (73,5%), atividades lúdicas (67,6%) ou uso de tecnologias (47,1%) visando aulas mais práticas, dinâmicas e interativas. Apesar da metodologia utilizada pelo professor seja satisfatória do ponto de vista do aluno, considera-se que existe uma necessidade do professor utilizar metodologias mais dinâmicas e práticas para promover o engajamento dos alunos às aulas e melhor entendimento do vocabulário complexo da biologia ou a compreensão da natureza dos conceitos biológicos.