Introdução: Hypancistrus sp. “acari-pão” é uma espécie amazônica amplamente comercializada no mercado de peixes ornamentais. A reprodução induzida dessa espécie é essencial tanto para o desenvolvimento da piscicultura quanto para a conservação ex situ. O manejo do sêmen, visando otimizar a qualidade seminal, é um passo crucial no desenvolvimento de biotecnologias reprodutivas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a influência dos hormônios Gonadorelina e Extrato Bruto de Hipófise de Carpa (EBHC) na qualidade seminal de Hypancistrus sp. Material e Métodos: O experimento foi realizado no Laboratório de Aquicultura de Peixes Ornamentais do Xingu (LAQUAX), da Universidade Federal do Pará (UFPA), campus Altamira, autorizado pelo Comitê de Ética para Uso Animal (nº 274188368-80) e SISBIO (nº 47941-5). Utilizaram-se 40 espécimes (comprimento de 9,11 ± 0,98 cm e peso de 31,05 ± 10,70 g). Três grupos, com oito indivíduos cada, foram submetidos a tratamentos com Gonadorelina nas concentrações de 60, 100 e 120 ?L.Kg-1. Dois grupos de controle foram utilizados: controle negativo (C-), sem indução hormonal, e controle positivo (C+), induzido com EBHC a 3 mg.Kg-1. Os hormônios foram administrados em solução salina (0,9% NaCl), com injeção intramuscular única (1 mL.Kg-1). Resultados: As dosagens de 60 ?L.Kg-1 de Gonadorelina e 3 mg.Kg-1 de EBHC resultaram em maior volume de sêmen (15,72 ± 8,34 ?L) e concentração espermática (1,40x10^6 SPTZ.mL-1), além de maior produção total de espermatozoides (2,80x10^6 SPTZ) em comparação ao controle negativo (P<0,05). No entanto, não houve diferença significativa na motilidade e integridade de membrana dos espermatozoides entre os grupos tratados. O controle positivo apresentou aumento de anomalias espermáticas (30,88%). Conclusão: A dosagem de 60 ?L.Kg-1 de Gonadorelina é uma alternativa eficaz ao EBHC (3 mg.Kg-1), promovendo boa produção seminal com menores taxas de anomalias espermáticas, sendo promissora para a reprodução de Hypancistrus sp.