Resumo Trabalho

ANÁLISE DE QUALIDADE DE RNA PARA ESTUDO DO PERFIL TRANSCRIPTÔMICO DE RATOS SUBMETIDOS A UMA SESSÃO DE EXERCÍCIO EXAUSTIVO

Autor(es): ISABELE DA SILVA PEREIRA e orientado por VÂNIA MARILANDE CECCATTO

Com o aperfeiçoamento contínuo das tecnologias de sequenciamento de DNA, RNA-Seq tornou-se um método bastante utilizado para análise do genoma funcional, e permite a medição dos níveis de transcritos em um genoma, como também determina a estrutura funcional dos genes. A extração de RNA consiste no primeiro passo para estudos de expressão gênica. A integridade e qualidade do RNA extraído garante a confiabilidade dos dados provenientes de RNA-Seq. O estudo de RNA-Seq em animais submetidos ao exercício, pode ser útil para identificar genes e vias metabólicas que são influenciadas pela atividade física. O objetivo desse trabalho foi analisar a qualidade e integridade dos RNAs extraídos de tecido muscular (sóleo) de ratos submetidos a uma sessão de exercício exaustivo, a fim de garantir o sucesso do sequenciamento (RNA-Seq) e posterior obtenção de padrões fenotípicos produzidos pelo exercício. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética para o Uso de Animais da Universidade Estadual do Ceará (CEUA-UECE) com o número de processo1592060/2014. O trabalho utilizou 12 ratos machos da linhagem Wistar, obtidos do biotério do Instituto Superior de Ciências Biomédicas da UECE (ISCB-UECE). Os animais apresentavam 60 dias, com peso médio de 220g. Eles foram mantidos em ambiente com temperatura controlada, água e ração ad libitum em ciclo claro/escuro de 12h/12h. Os animais foram divididos em dois grupos: Grupo Controle (GC) e Grupo Treinado(GT), 6 animais por grupo. Os mesmos foram familiarizados à esteira ergométrica adaptada para roedores (Imbramed®) no período noturno, por duas semanas. Após a adaptação o GT foi submetido a uma sessão de exercício exaustivo, que consistiu em um incremento de 0,2km/h na intensidade do exercício a cada 3 minutos, até que o animal atingisse a exaustão. Os animais foram eutanasiados 24 horas após a sessão de exercício com Tiopental (150mg/Kg). A pata esquerda traseira do animal foi dissecada, o músculo sóleo removido e armazenado em solução RNAlater®. A extração de RNA total foi feita com os reagentes TRIzol® (Thermo Fisher Scientific) e RNeasy Plus Mini Kit® (QIAGEN) de acordo com as recomendações e especificações dos fornecedores. Para analisar a integridade do RNA foi realizado eletroforese capilar das amostras, através do sistema Agilent 2100 Bioanalyzer, (AgilentTecnologies®). A qualidade do RNA foi verificada pelo número de integridade do RNA (RIN). Os resultados demonstraram bandas 18S e 28S íntegras em todas as amostras. A concentração de RNA obtida nas amostras foi de 466.6 ± 21.7 e a razão 28S/18S foi de 1.4 ± 0.02.O valor obtido do RIN foi 8.1±0.14. Os resultados obtidos correspondem as exigências de qualidade e integridade do RNA para o sequenciamento de nova geração. As análises realizadas na plataforma Bioanalyzer atestaram a qualidade do RNA obtido de tecido muscular esquelético. Portanto, as amostras estão adequadas para a preparação das bibliotecas de cDNAe posterior sequenciamento (RNA-seq).

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